听到陈浩然的发问,张兴运也是一愣,不过他很快就进入了状态。
“正在进行川贝聚合酶链式反应限制性片段长度多态性实验。”
张兴运说道。
实验室中,钟医已经做好了实验的准备,也取好了川贝。
这个实验和其他实验不同,实验前试剂和耗材的准备及前处理分子生物学鉴别与理化鉴别不同,前者对试剂和耗材的无菌程度要求较高。
如果不注意实验前的灭菌过程,往往会导致实验失败。
在提取、纯化、扩增、酶切和电泳过程中均会使用试剂,目前常用商品试剂盒,按照试剂盒使用说明操作即可。
并且,试剂盒配备的无菌超纯水,可用实验用无菌超纯水代替,为过滤超纯水经高压蒸汽灭菌30in所得。
实验中常用到的耗材,包括钢珠、镊子、刀片、滤纸、玻璃平皿、不同规格的枪头、不同规格的离心管等,都应进行高压蒸汽灭菌并烘干后使用,以免污染样品,影响实验结果。
在正式实验之前,除上述灭菌步骤外,建议用医用酒精喷洒实验台面,擦拭移液枪和一次性手套外壁,待酒精挥干之后,再开始实验。
“他们这是在进行灭菌,是我们中医忽略的地方。”张兴运说道。
“嗯。”陈浩然对这一点没有反驳。
钟医在对川贝前处理、粉碎和的提取关于样品的前处理和粉碎。
实验中,只需要取本品0。1g,依次用75乙醇1l、灭菌超纯水1l清洗,吸干表面水分,置乳钵中研磨成极细粉,即为对样品进行表面灭菌后,进行研磨粉碎。
“这一步是手工粉碎,效率较低,建议使用球磨仪进行粉碎,可更高效快速地得到样品极细粉。”张兴运在窗外接受道。
就像是听到了张兴运的话,钟医在实验室中用起了球磨仪。
像是要对比手工研磨和球磨仪之间的差别。
钟医在使用球磨仪时,将样品连同灭菌后的钢珠适量置于离2号机中。
药物研究管中,利用样品、钢珠、离心管之间的高速碰撞。使样品得以粉碎,注意勿使样品长时间处于高速震荡中。
为了避免长时间的高速震荡产生大量的热,导致样品降解。适当频率、短时间、多次研磨即可。
“在使用新型广谱植物基因组快速提取试剂盒提取,提取过程中需要注意的是,为将吸附柱上的完全洗脱下来,建议尽量将洗脱液加在吸附柱中心的滤膜上。”
“这样,准备工作算是昨晚了。”
“下一步,就是用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性法实验需要随行空白和对照,分别用与样品等量的无菌超纯水和对照药材来进行实验。”
张兴运介绍道。
其实这个方法,张兴运也只看钟医做过两次,自己也只是亲自动手做过一次。
不过仅仅那一次的体验,就像是让他打开了新世界的大门。
他仿佛看见了与之前世界完全不一样的世界正在向他敞开怀抱。
世界还是那个世界,只是大家对世界的理解不一样了。
可理解不一样,并不代表世界的本质会改变。
这正是这个世界有趣以及残忍的地方之一。